Ny PCR fatran'ny fluorescence amin'ny fotoana tena izy dia fomba fandrefesana ny totalin'ny vokatra aorian'ny tsingerin'ny polymerase chain reaction (PCR) amin'ny fanehoan-kevitra fanamafisana ADN amin'ny fampiasana fluorophore.Ny fomba dia ampiasaina hamaritana ny filaharan'ny ADN manokana ao amin'ny santionany hotsapaina amin'ny alàlan'ny fomba fanondroana anatiny na ivelany.Hatramin'ny nanombohany dia nanjary malaza amin'ny mpampianatra laboratoara ny fitiliana PCR fluorescent quantitative.
Fitsipika PCR Fluorescence: Fluorescence PCR, voalohany antsoina hoe TaqManPCR ary taty aoriana koa ny Real-TimePCR, dia teknika fanombanana asidra nokleika vaovao novolavolain'ny PE (PerkinElmer) tany Etazonia tamin'ny taona 1995. loko fluorescent amin'ny PCR mahazatra mba hanatrarana ny asany.Ny fitsipika: rehefa mandeha ny fanehoan-kevitry ny PCR, dia miangona ny vokatra fanehoan-kevitra PCR ary mitombo mitovy ny haben'ny mari-pamantarana fluorescent.Isaky ny tsingerina, dia angonina famantarana hamafin'ny fluorescence mba ahafahantsika manara-maso ny fiovan'ny habetsahan'ny vokatra amin'ny fiovan'ny hamafin'ny fluorescence ary amin'izany dia mahazo grafika curve amplification fluorescence.
Amin'ny ankapobeny, ny curve amplification fluorescence dia azo zaraina ho dingana telo: ny dingana famantarana ny fluorescence background, ny dingana amplification exponential famantarana fluorescence ary ny dingana plateau.Mandritra ny dingana famantarana ny background, ny famantarana fluorescence amplified dia saron'ny famantarana ny fluorescence background ary ny fiovan'ny habetsahan'ny vokatra dia tsy azo faritana.Ao amin'ny dingana lembalemba, ny vokatra fanamafisam-peo dia tsy mitombo be intsony, tsy misy fifandraisana an-tsipika eo amin'ny habetsaky ny vokatra farany sy ny habetsaky ny môdely fanombohana, ary tsy azo kajy ny laharan'ny dika mitovy amin'ny ADN mifototra amin'ny habetsaky ny vokatra PCR farany.Ao amin'ny dingana amplification exponential amin'ny famantarana fluorescent ihany no misy fifandraisana tsipika eo amin'ny logaritma amin'ny habetsaky ny vokatra PCR sy ny habetsaky ny môdely fanombohana, ary afaka misafidy ny hamantatra izany isika amin'ity dingana ity.Ho fanamorana ny fampitomboana sy ny fampitahana, hevitra roa tena manan-danja no nampidirina tao amin'ny teknikan'ny PCR fatran'ny fluorescent tena izy: ny tokonam-baravaran'ny fluorescence sy ny sandan'ny CT.
Ny tokonam-baravarana dia sanda napetraka artifisialy amin'ny curve amplification fluorescence.dingana exponential amin'ny amplification PCR.
Sanda Ct: dia ny isan'ny tsingerina izay nandalovan'ny famantarana fluorescence amin'ny fantsona fanehoan-kevitra tsirairay mba hahatongavana amin'ny sandan'ny sehatra napetraka.
Ny fifandraisana misy eo amin'ny sandan'ny Ct sy ny maodely fanombohana: nasehon'ny fanadihadiana fa ny sanda Ct isaky ny môdely dia manana fifandraisana tsipika miaraka amin'ny logaritma amin'ny laharan'ny kopia fanombohana an'io môdely io, arakaraka ny isan'ny dika mitovy amin'ny laharana fanombohana, ny kely kokoa ny Ct. sanda.Ny sandan'ny Ct dia tsy miova.Ny curve manara-penitra dia azo atao amin'ny alàlan'ny fenitra misy laharan'ny kopia fanombohana fantatra, izay ny fandrindrana marindrano dia maneho ny logaritma amin'ny laharan'ny kopia fanombohana ary ny fandrindrana mitsangana dia maneho ny sanda Ct araka ny asehon'ny sary etsy ambany.
Noho izany, amin'ny fahazoana ny sandan'ny Ct amin'ny santionany tsy fantatra, ny laharan'ny dika mitovy amin'io santionany io dia azo kajy amin'ny curve mahazatra.
Ny sandan'ny Ct dia tsy miovaova ary mety hisy fiantraikany amin'ny santionany sy fitaovana samihafa, na dia miverimberina in-2 amin'ny fitaovana iray aza ny santionany mitovy, dia mety miovaova ny sanda Ct.
Fandinihana fluorescence quantitative: azo zaraina ho probe fluorescent sy loko fluorescent arakaraka ny marika ampiasaina ny fitiliana fluorescence quantitative.Ny probe fluorescent dia ahitana ny teknolojia Fanilo (teknolojia fanilon'ny molekiola, asehon'ny American Tagyi), ny probe TaqMan (soloin'ny ABI) ary ny teknolojia FRET (soloin'i Roche);Ny lokon'ny fluorescent dia misy lokon'ny fluorescent saturated sy loko tsy misy fluorescent, ny solontena mahazatra amin'ny loko tsy misy fluorescent dia SYBRGreen I, izay matetika ampiasaina ankehitriny;saturated Ny solontena mahazatra amin'ny loko fluorescent tsy mahavoky dia SYBRGreenⅠ;Ny lokon'ny fluorescent saturated dia EvaGreen, LCGreen, sns.
SYBRGreenI dia loko mamatotra ADN fampiasa matetika ho an'ny PCR fluorescent, izay mamatotra tsy manokana amin'ny ADN misy tady roa.Ao amin'ny fanjakana malalaka, ny SYBRGreenI dia mamoaka fluorescence malemy, fa rehefa mifamatotra amin'ny ADN misy tady roa, dia mitombo 1000 heny ny fluorescence.Noho izany, ny totalin'ny famantarana fluorescence avoakan'ny fanehoan-kevitra dia mifanandrify amin'ny habetsaky ny ADN misy tady roa ary mitombo rehefa mitombo ny vokatra fanamafisam-peo.
Ny tombony amin'ny loko mamatotra ADN misy tady roa: famolavolana andrana tsotra, primer 2 ihany no ilaina, tsy mila manamboatra probe, tsy mila manamboatra probe maromaro ho an'ny fitiliana haingana ny fototarazo marobe, fahaizana manao famakafakana curve miempotra, fitsapana ny maha-tokana ny fanehoan-kevitra fanamafisam-peo, vidiny voalohany ambany, ankapobeny tsara ary noho izany dia matetika ampiasaina amin'ny fikarohana ao an-trano sy any ivelany.
Fomba fitiliana fluorescent (teknika Taqman): Rehefa atao ny fanamafisam-peo PCR, dia ampiana primers roa miaraka amin'ny probe fluorescent manokana.Rehefa tsy voafehy ny probe, ny mari-pamantarana fluorescence avoakan'ny vondrona mpanao gazety dia entin'ny vondrona vonoina ary tsy hitan'ny fitaovana PCR;mandritra ny fanamafisam-peo PCR (amin'ny dingana fanitarana), ny hetsika cleavage 5'-3' an'ny enzyme Taq dia manimba ny probe amin'ny fomba enzymatically, ka mahatonga ny vondrona fluorescence mpanao gazety sy ny vondrona fluorescence vonoina.
Fampiharana ny fluorescent quantitative PCR.
Fikarohana momba ny biolojia molekule:
1. Famakafakana asidra nokleika fatra.Famakafakana quantitative sy qualitative amin'ny areti-mifindra, fitiliana ny micro-organismes pathogenic na viriosy, toy ny valan'aretina gripa A (H1N1) vao haingana, ny fitiliana ny isan'ny dika mitovy amin'ny zavamaniry sy ny biby transgenika, ny fahitana ny tahan'ny tsy fahavitrihana ny fototarazo RNAi, sns.
2. Famakafakana fanehoana ny fototarazo samihafa.Fampitahana ny fahasamihafan'ny fanehoana ny fototarazo eo amin'ny santionany voatsabo (ohatra ny fitsaboana zava-mahadomelina, ny fitsaboana ara-batana, ny fitsaboana simika, sns.), ny fahasamihafan'ny fanehoana ny fototarazo manokana amin'ny dingana samihafa ary ny fanamafisana ny microarray cDNA na ny valin'ny fanehoan-kevitra samihafa
3. Fikarohana SNP.Ny fitadiavana ny polymorphisme nucleotide tokana dia zava-dehibe amin'ny fandalinana ny fahasamihafan'ny tsirairay amin'ny aretina isan-karazany na ny valintenin'ny tsirairay amin'ny zava-mahadomelina manokana, ary noho ny firafitry ny molekiolan'ny molekiola, raha vao fantatra ny filaharan'ny SNP, dia mora sy marina ny Ampiasao ity teknika ity mba hamantarana SNP avo lenta.
4. Fikarohana methylation.Ny methylation dia mifandray amin'ny aretina maro amin'ny olombelona, indrindra fa ny homamiadana, ary i Laird dia nitatitra teknika antsoina hoe Methylight, izay mitsabo ny ADN alohan'ny amplification mba hahatonga ny cytosine tsy misy methylated ho uracil ary tsy misy fiantraikany amin'ny cytosine methylated, mampiasa primer manokana sy Taqman probes mba hanavahana ny ADN methylated sy unmethylated. .saro-pady kokoa.
Fikarohana ara-pitsaboana:
1. Diagnostika mialohan'ny nahaterahana: tsy afaka mitsabo aretina manaranaka vokatry ny fototarazo niova ny olona, ary hatramin'izao, dia tsy azony atao afa-tsy ny mampihena ny isan'ny zaza marary teraka amin'ny alalan'ny fanaraha-maso alohan'ny nahaterahana mba hisorohana ny fisian'ny aretina isan-karazany.Izany dia fomba tsy invasive izay mora eken'ny vehivavy bevohoka.
2. Famantarana ny pathogen: Ny fitsapam-pahaizana PCR fluorescent quantitative dia mamela ny hamaritana ny otrikaretina toy ny gonococcus, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma solium, virosy papilloma olombelona, virosy herpes simplex, virosy immunodeficiency olombelona, viriosy hepatita, viriosy gripa, Mycobacterium tuberculosis, EBV ary cytomegalovirus.Manana tombony amin'ny fahatsapana avo, ny haben'ny santionany ambany, ny hafainganam-pandeha ary ny fahatsorana raha oharina amin'ny fomba fitiliana nentim-paharazana.
3. Ny fanombanana ny fahombiazan'ny zava-mahadomelina: ny famakafakana ny viriosy hepatita B (HBV) sy ny viriosy hepatita C (HCV) dia mampiseho fa ny fifandraisan'ny viriosy sy ny fahombiazan'ny fanafody sasany.Raha mihena ny haavon'ny HBV-ADN mandritra ny fitsaboana lamivudine ary avy eo mitombo indray na mihoatra ny ambaratonga teo aloha, dia manondro ny fiovan'ny viriosy izany.
4. Fitsapana momba ny oncogène: Na dia tsy mbola mazava aza ny fomba fiasan'ny fivontosana, dia ekena fa ny fiovan'ny fototarazo mifandraika amin'izany no fototry ny fiovan'ny oncogène.Ny fitomboan'ny fanehoana sy ny fiovan'ny oncogène dia hita amin'ny dingana voalohany amin'ny fivontosana maro.Ny PCR amin'ny fluorescence amin'ny fotoana tena izy dia tsy mahomby amin'ny fitiliana ny fiovan'ny fototarazo, fa afaka mamantatra tsara ihany koa ny fanehoana ny oncogenes.Ity fomba ity dia nampiasaina hamantarana ny fanehoana karazana fototarazo isan-karazany ao anatin'izany ny fototarazo telomerase hTERT, ny fototarazo WT1 leukemia granulocytic mitaiza, ny fototarazo ER oncogenic, ny fototarazo PSM homamiadan'ny prostaty, ary ny fototarazo viriosy mifandray amin'ny tumor.
Nadika tamin'ny www.DeepL.com/Translator (dika maimaim-poana)
Fotoana fandefasana: Jun-21-2022