1. Raha mahazo sela misy sela mangatsiaka ve aho, azoko atao ve ny mametraka azy mivantana ao anaty azota rano mba hotehirizina?
Amin'ny toe-javatra maro, ny sela entina amin'ny ranomandry maina (-80°C) dia azo averina amin'ny azota ranoka ary avy eo dia levona haingana avy eo.Na izany aza, mety hihena ny fahafahan'ny sela aorian'ny fitsaboana toy izany.Ho an'ny tsipika sela saropady sasany, mety hanasarotra kokoa ny fanarenana ny sela izany.Ity trangan-javatra ity dia heverina fa vokatry ny fiovan'ny firafitry ny kristaly gilasy ao anatin'ny sela vokatry ny fiovan'ny mari-pana.Izany no nanolorana azy ho ny sela dia tokony ho levona sy kolontsaina faran'izay haingana aorian'ny fandraisana.Ahena ny fotoana fitehirizana amin'ny -80°C.Ity mari-pana ity dia ampiasaina amin'ny fitaterana ihany.
2. Inona no fepetra fiarovana tokony horaisina rehefa manala ny sela avy amin'ny azota azota mba hamerenana azy?
Ny cryotube sela amin'ny azota ranoka izay tsy voaisy tombo-kase tanteraka ary misy azota mitete ao anatiny dia mety hiteraka fipoahana raha miakatra be ny hafanan'ny cryotube rehefa mitsonika.Noho izany dia ilaina ny manao solomaso sy fonon-tanana fiarovana rehefa manala ny sela amin'ny azota.Ho an'ny famelomana indray dia tokony hohozongozonina tsy an-kijanona ao anaty rano fandroana 37°C ny fantsona mangatsiaka mba hanalefahana tanteraka ny vahaolana mangatsiaka ao anatin'ny 1-2 minitra.Aorian'izay, esory ny ivelan'ny fantsona miaraka amin'ny famafazana alikaola, ary ento ao anaty latabatra madio indrindra ary afindrao amin'ny fantsona centrifuge ny sela miaraka amin'ny 10 ml kolontsaina kolontsaina nanampy, centrifuge amin'ny 1000 rpm mandritra ny 5-10 minitra, ario ny supernatant, ampio ny habetsaham-pamokarana sahaza ary atsipazo ny tavoara kolontsaina ary atsipazo ao anaty incubator CO2 5%.
3. Nahoana ny sela no tokony hotehirizina ao amin'ny dingan'ny etona amin'ny siny misy azota ranoka fa tsy ao amin'ny dingan'ny rano?
Ny sela voatahiry ao amin'ny dingan'ny entona azota azota dia azo inoana fa ho velona kokoa.Raha ao amin'ny dingan'ny ranon-javatra azota azota, raha tsy voaisy tombo-kase tsara ny fantsona lyophilisation na misy mitete, ny fifandraisana mivantana eo amin'ny sela sy ny azota ranon-javatra dia mety hanimba ny fahafahan'ny sela aorian'ny fandoroana.
4. Ho an'ny sela fampiatoana, ahoana no hanovako ny fitaovana kolontsaina?
Ny kolontsaina sela fampiatoana dia azo atao amin'ny alalan'ny fampitomboana ny media vaovao (raha misy toerana malalaka) na amin'ny fanasarahana ny sela amin'ny fitaovana taloha amin'ny centrifugation (100 xg mandritra ny 5 minitra) ary avy eo dia avereno indray ireo sela mitete amin'ny fitaovana vaovao.Na izany aza, ho an'ny ankamaroan'ny tsipika sela fampiatoana, ny fampidirana tsotra fotsiny dia fomba tsara kokoa.Na izany na tsy izany, mila havaozina ny fitaovana alohan'ny hahatongavan'ny sela ny hakitroky ny saturation lehibe indrindra.Ny hakitroky ny sela dia miovaova eo anelanelan'ny 3 x 10 5 sy 2 x 10 6 miankina amin'ny tsipika sela sy ny kolontsaina (fitsaharana na fihetsehana, haavon'ny oxygenation, sns.).Ny sela dia tsy maintsy alevina amin'ny fifantohana ambany kokoa amin'ny sela mba ahafahana mamerina ny otrikaina ampy mba hitazonana ny sela mitombo ara-logarithme.Raha ovaina tsotra izao ny medium nefa tsy mampihena ny hakitroky ny sela, dia hanjavona haingana ny sela ary ho faty.Raha levona eo ambanin'ny hakitrony kely indrindra ny sela, dia hiditra ao anatin'ny dingana fahatarana izy ireo ary hitombo tsikelikely na ho faty.Ny tsipika sela fampiatoana tsirairay dia manana hakitroky saturation sy elanelam-potoana hafa, ka ny fanisana sela isan'andro no fomba hanaraha-maso ny tsipika sela fampiatoana*.
5. Inona no haavon'ny CO2 atolotra ho an'ny kolontsaina sela?
Na dia eo amin'ny 0,03% hatramin'ny 40% aza ny haavon'ny CO2 ao amin'ny rafitra kolontsaina sela (matetika manodidina ny 0,03% CO2 ao amin'ny atmosfera), dia tena mahazatra ny tsy fisian'ny CO2 ampiana amin'ny rivotra na ny fifantohana CO2 amin'ny 5% hatramin'ny 10%.Zava-dehibe ny manitsy ny fifantohan'ny sodium bikarbonate amin'ny antonony mba handanjalanjana amin'ny haavon'ny CO2 amin'ny dingan'ny entona.Ny sela dia mamokatra CO2 ary mitaky asidra karbônika kely ho an'ny fitomboana sy ny fahavelomana.Raha tsy misy CO2 ampiana ary mihamaro ny sela, dia azo ampiasaina 4 mM (0,34 g/L) ny sodium bikarbonate anhydrous.Na izany aza, amin'io fotoana io dia tokony hohenjana ny saron'ny tavoara kolontsaina.Raha mila 5% na 10% CO2 ny rafitra kolontsaina, dia ampiasao 23,5 mM (1,97 g/L) na 47 mM (3,95 g/L) sodium bikarbonate amin'ny 37°C, miaraka amin'ny pH voalohany eo amin'ny 7,6 eo ho eo.Ao anatin'ireo fepetra ireo, ny tavoahangy dia tokony havela tsy misy fonony na ny lovia Petri dia tokony hampiasaina mba hitazonana ny equilibrium entona.
6. Nahoana ny sela sasany no mila sodium pyruvate?Ohatrinona ny sodium pyruvate tokony ampiako amin'ny medium?
Pyruvate dia metabolite asidra organika ao amin'ny lalan'ny glycolytic* izay mora miditra sy mivoaka ao amin'ny sela.Noho izany, ny fampidirana ny sodium pyruvate amin'ny medium dia manome loharano angovo sy loharano karbônina ho an'ny anabolisma, manampy amin'ny fitazonana sela manokana, manampy amin'ny cloning sela na ilaina rehefa mihena ny fatran'ny serum ao amin'ny medium.Ny sodium pyruvate koa dia manampy amin'ny fampihenana ny cytotoxicity vokatry ny fluorescence.Ny sodium pyruvate dia matetika ampiana amin'ny fifantohana farany amin'ny 1 mM.Matetika ny vahaolana fitehirizana 100 mM (100X) ny vahaolana sodium pyruvate azo amidy.
Nadika tamin'ny www.DeepL.com/Translator (dika maimaim-poana).
Fotoana fandefasana: Jun-21-2022